RNAprep ਸ਼ੁੱਧ FFPE ਕਿੱਟ

ਏ -1 ਸੈੱਲ ਲਾਇਸਿਸ ਜਾਂ ਸਮਲਿੰਗੀਕਰਨ ਕਾਫ਼ੀ ਨਹੀਂ ਹੈ

---- ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਘਟਾਓ, ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾਓ, ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਲਾਇਸਿਸ ਸਮਾਂ ਵਧਾਓ.

A-2 ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਰਕਮ ਬਹੁਤ ਵੱਡੀ ਹੈ

---- ਵਰਤੇ ਗਏ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ ਜਾਂ ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾਓ.

ਏ -1 ਨਾਕਾਫ਼ੀ ਸੈੱਲ ਲਾਇਸਿਸ ਜਾਂ ਇਕਸਾਰਤਾ

---- ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਘਟਾਓ, ਲਾਇਸਿਸ ਬਫਰ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਧਾਓ, ਇਕਸਾਰਤਾ ਅਤੇ ਲਾਇਸਿਸ ਸਮਾਂ ਵਧਾਓ.

A-2 ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਰਕਮ ਬਹੁਤ ਵੱਡੀ ਹੈ

---- ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਵੱਧ ਤੋਂ ਵੱਧ ਪ੍ਰੋਸੈਸਿੰਗ ਸਮਰੱਥਾ ਵੇਖੋ.

ਏ -3 ਆਰਐਨਏ ਕਾਲਮ ਤੋਂ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਨਹੀਂ ਕੱਿਆ ਗਿਆ ਹੈ

---- RNase- ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ ਪਾਉਣ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਇਸਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿਗ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਕੁਝ ਮਿੰਟਾਂ ਲਈ ਛੱਡ ਦਿਓ.

Eluent ਵਿੱਚ ਏ -4 ਈਥੇਨੌਲ

---- ਧੋਣ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਦੁਬਾਰਾ ਸੈਂਟਰਿਫਿਜ ਕਰੋ ਅਤੇ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਧੋਣ ਵਾਲੇ ਬਫਰ ਨੂੰ ਹਟਾਓ.

ਏ -5 ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾਇਆ ਨਹੀਂ ਗਿਆ ਹੈ

---- ਸੈੱਲ ਇਕੱਠੇ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਸਭਿਆਚਾਰ ਦੇ ਮਾਧਿਅਮ ਨੂੰ ਜਿੰਨਾ ਸੰਭਵ ਹੋ ਸਕੇ ਹਟਾਉਣਾ ਨਿਸ਼ਚਤ ਕਰੋ.

ਏ -6 ਆਰ ਐਨ ਏ ਸਟੋਰ ਵਿੱਚ ਸਟੋਰ ਕੀਤੇ ਸੈੱਲ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ centੰਗ ਨਾਲ ਸੈਂਟਰਿਫਿgedਜਡ ਨਹੀਂ ਹੁੰਦੇ

---- ਆਰ ਐਨ ਏ ਸਟੋਰ ਦੀ ਘਣਤਾ cellਸਤ ਸੈੱਲ ਕਲਚਰ ਮਾਧਿਅਮ ਨਾਲੋਂ ਵੱਧ ਹੈ; ਇਸ ਲਈ ਕੇਂਦਰਤੰਤਰ ਸ਼ਕਤੀ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ. ਇਹ 3000x g 'ਤੇ ਸੈਂਟੀਫਿਜ ਕਰਨ ਦਾ ਸੁਝਾਅ ਦਿੱਤਾ ਗਿਆ ਹੈ.

ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਏ -7 ਘੱਟ ਆਰਐਨਏ ਸਮਗਰੀ ਅਤੇ ਭਰਪੂਰਤਾ

---- ਇਹ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ ਸਕਾਰਾਤਮਕ ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ ਕਿ ਕੀ ਘੱਟ ਉਪਜ ਨਮੂਨੇ ਦੇ ਕਾਰਨ ਹੈ.

ਏ -1 ਸਮਗਰੀ ਤਾਜ਼ੀ ਨਹੀਂ ਹੈ

---- ਤਾਜ਼ੇ ਟਿਸ਼ੂਆਂ ਨੂੰ ਤਰਲ ਨਾਈਟ੍ਰੋਜਨ ਵਿੱਚ ਤੁਰੰਤ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਤੁਰੰਤ ਆਰਐਨਏਸਟੋਰ ਰੀਐਜੈਂਟ ਵਿੱਚ ਪਾਉਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਜੋ ਐਕਸਟਰੈਕਸ਼ਨ ਪ੍ਰਭਾਵ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਇਆ ਜਾ ਸਕੇ.

A-2 ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਰਕਮ ਬਹੁਤ ਵੱਡੀ ਹੈ

---- ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ.

A-3 RNase ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣn

---- ਹਾਲਾਂਕਿ ਕਿੱਟ ਵਿੱਚ ਮੁਹੱਈਆ ਕੀਤੇ ਗਏ ਬਫਰ ਵਿੱਚ RNase ਨਹੀਂ ਹੁੰਦਾ, ਪਰ ਕੱ extraਣ ਦੀ ਪ੍ਰਕਿਰਿਆ ਦੇ ਦੌਰਾਨ RNase ਨੂੰ ਦੂਸ਼ਿਤ ਕਰਨਾ ਆਸਾਨ ਹੁੰਦਾ ਹੈ ਅਤੇ ਇਸਨੂੰ ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਸੰਭਾਲਿਆ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.

ਏ -4 ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ

---- ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਬਫਰ ਨੂੰ ਬਦਲੋ ਅਤੇ ਇਹ ਸੁਨਿਸ਼ਚਿਤ ਕਰੋ ਕਿ ਉਪਯੋਗਯੋਗ ਚੀਜ਼ਾਂ ਅਤੇ ਲੋਡਿੰਗ ਬਫਰ ਆਰਨੇਸ ਗੰਦਗੀ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਹਨ.

ਏ -5 ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਲਈ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਲੋਡਿੰਗ

---- ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਲੋਡਿੰਗ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ, ਹਰੇਕ ਖੂਹ ਦੀ ਲੋਡਿੰਗ 2 μg ਤੋਂ ਵੱਧ ਨਹੀਂ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ.

A-1 ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਰਕਮ ਬਹੁਤ ਵੱਡੀ ਹੈ

---- ਨਮੂਨੇ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਘਟਾਓ.

ਏ -2 ਕੁਝ ਨਮੂਨਿਆਂ ਵਿੱਚ ਉੱਚ ਡੀਐਨਏ ਸਮਗਰੀ ਹੁੰਦੀ ਹੈ ਅਤੇ ਡੀਨੇਸ ਨਾਲ ਇਲਾਜ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.

---- ਪ੍ਰਾਪਤ ਕੀਤੇ ਆਰਐਨਏ ਦੇ ਹੱਲ ਲਈ ਆਰਨੇਸ-ਮੁਕਤ ਡੀਨੇਸ ਇਲਾਜ ਕਰੋ, ਅਤੇ ਆਰਐਨਏ ਨੂੰ ਇਲਾਜ ਦੇ ਬਾਅਦ ਦੇ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਲਈ ਸਿੱਧਾ ਵਰਤਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਾਂ ਆਰਐਨਏ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਿੱਟਾਂ ਦੁਆਰਾ ਹੋਰ ਸ਼ੁੱਧ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.

ਕੱਚ ਦੇ ਸਮਾਨ ਲਈ, 150 ° C 'ਤੇ 4 ਘੰਟਿਆਂ ਲਈ ਪਕਾਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ. ਪਲਾਸਟਿਕ ਦੇ ਕੰਟੇਨਰਾਂ ਲਈ, 0.5 ਐਮ NaOH ਵਿੱਚ 10 ਮਿੰਟ ਲਈ ਡੁਬੋਇਆ ਜਾਂਦਾ ਹੈ, ਫਿਰ ਆਰਨੇਸ-ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ ਨਾਲ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਕੁਰਲੀ ਕਰੋ ਅਤੇ ਫਿਰ ਆਰਨੇਸ ਨੂੰ ਪੂਰੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਹਟਾਉਣ ਲਈ ਨਸਬੰਦੀ ਕਰੋ. ਪ੍ਰਯੋਗ ਵਿੱਚ ਵਰਤੇ ਗਏ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਜਾਂ ਹੱਲ, ਖਾਸ ਕਰਕੇ ਪਾਣੀ, ਆਰ ਐਨਸੇ ਤੋਂ ਮੁਕਤ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ. ਸਾਰੀਆਂ ਰੀਐਜੈਂਟ ਤਿਆਰੀਆਂ ਲਈ RNase- ਮੁਕਤ ਪਾਣੀ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰੋ (ਇੱਕ ਸਾਫ ਕੱਚ ਦੀ ਬੋਤਲ ਵਿੱਚ ਪਾਣੀ ਪਾਓ, 0.1% (V/V) ਦੀ ਅੰਤਮ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਵਿੱਚ DEPC ਜੋੜੋ, ਰਾਤੋ ਰਾਤ ਹਿਲਾਓ ਅਤੇ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕਰੋ).