1 ਯੂਨਿਟ (ਯੂ) ਟਾਕ ਪਲੈਟੀਨਮ ਡੀਐਨਏ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨੂੰ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵਜੋਂ ਪਰਿਭਾਸ਼ਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਜੋ 10 ਐਨਐਮਓਲ ਡੀਓਕਸੀਨੁਕਲੀਓਟਾਈਡਸ ਨੂੰ ਐਸਿਡ-ਘੁਲਣਸ਼ੀਲ ਪਦਾਰਥਾਂ ਵਿੱਚ 74 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ ਅੰਦਰ ਐਕਟਿਵੇਟਿਡ ਸੈਲਮਨ ਸ਼ੁਕ੍ਰਾਣੂ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਟੈਂਪਲੇਟ/ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਜੋਂ ਵਰਤਣ ਲਈ ਲੋੜੀਂਦਾ ਹੁੰਦਾ ਹੈ.
SDS-PAGE ਖੋਜ ਦੁਆਰਾ ਸ਼ੁੱਧਤਾ 99%ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੈ; ਐਕਸੋਜੇਨਸ ਨਿ nuਕਲੀਜ਼ ਦੀ ਕੋਈ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ ਲੱਭੀ ਜਾਂਦੀ; ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨੋਮ ਵਿੱਚ ਸਿੰਗਲ-ਕਾਪੀ ਜੀਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ; ਜਦੋਂ ਕਮਰੇ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਤੇ ਇੱਕ ਹਫ਼ਤੇ ਲਈ ਸਟੋਰ ਕੀਤਾ ਜਾਂਦਾ ਹੈ ਤਾਂ ਕੋਈ ਮਹੱਤਵਪੂਰਣ ਗਤੀਵਿਧੀ ਨਹੀਂ ਬਦਲਦੀ.
ਇਸ ਵਿੱਚ 5′-3 ′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਅਤੇ 3′-5 ′ ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਸਦੀ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਪੀਐਫਯੂ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਅੱਗੇ ਹੈ. ਟਾਕ ਪਲੈਟੀਨਮ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਪੀਡ ਪੀਐਫਯੂ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨਾਲੋਂ ਤੇਜ਼ ਹੈ ਅਤੇ ਵਿਸਤਾਰ ਕਾਰਜਕੁਸ਼ਲਤਾ ਵਧੇਰੇ ਹੈ. ਪੀਸੀਆਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਸਿੱਧੇ ਤੌਰ 'ਤੇ ਧੁੰਦਲੇ ਸਿਰੇ' ਤੇ ਜੋੜਿਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ ਜਾਂ ਟੀਏ ਵੈਕਟਰ ਨਾਲ ਕਲੋਨ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਜੇ ਕਲੋਨਿੰਗ ਦੀ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਸੁਧਾਰਨ ਦੀ ਜ਼ਰੂਰਤ ਹੈ, ਤਾਂ ਟੀਏ ਵੈਕਟਰ ਵਿੱਚ ਕਲੋਨਿੰਗ ਕਰਨ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਪਹਿਲਾਂ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰਨ ਅਤੇ 3'-ਡੀਏ ਓਵਰਹੈਂਗ ਜੋੜਨ ਦੀ ਸਿਫਾਰਸ਼ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ.
ਵਨ-ਟਿਬ ਟਾਕ ਪਲੈਟੀਨਮ ਮਾਸਟਰਮਿਕਸ (ਨੈਸ਼ਨਲ ਹਾਈ-ਟੈਕ ਉਤਪਾਦ ਸਰਟੀਫਿਕੇਸ਼ਨ)
Ta ਤਾਕ ਪਲੈਟੀਨਮ ਮਾਸਟਰਮਿਕਸ ਨੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਅਤੇ ਸੰਵੇਦਨਸ਼ੀਲਤਾ ਵਿੱਚ ਸੁਧਾਰ ਕੀਤਾ ਹੈ ਅਤੇ ਉੱਚ ਜੀਸੀ ਸਮਗਰੀ, ਸੈਕੰਡਰੀ ਬਣਤਰ ਅਤੇ ਇਸ ਤਰ੍ਹਾਂ ਦੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਨਮੂਨੇ ਵਧਾ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਟੀਚੇ ਦੇ ਨਮੂਨੇ ਦੀਆਂ ਘੱਟ ਤੋਂ ਘੱਟ 2 ਕਾਪੀਆਂ ਵਧਾਈਆਂ ਜਾ ਸਕਦੀਆਂ ਹਨ, ਵਧੇਰੇ ਸਹੀ ਪ੍ਰਯੋਗਾਤਮਕ ਨਤੀਜਿਆਂ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾਉਂਦਿਆਂ.
■ ਵਿਲੱਖਣ ਤੈਕ ਪਲੈਟੀਨਮ ਮਾਸਟਰਮਿਕਸ ਫਾਰਮੂਲਾ ਸਮੁੱਚੀ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਪ੍ਰਣਾਲੀ ਨੂੰ ਬਹੁਤ ਸਥਿਰ ਬਣਾਉਂਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ 4 ° C 'ਤੇ ਬਾਰ ਬਾਰ ਫ੍ਰੀਜ਼-ਪਿਘਲਣ ਜਾਂ ਲੰਮੇ ਸਮੇਂ ਦੇ ਭੰਡਾਰਨ ਨਾਲ ਗਤੀਵਿਧੀ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਨਹੀਂ ਹੋਵੇਗੀ.
Stable ਸਥਿਰ ਅਤੇ ਕੁਸ਼ਲ ਪੂਰਵ-ਤਿਆਰ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਸ਼ਰਤ ਘੋਲ ਕਾਰਜ ਨੂੰ ਤੇਜ਼ ਅਤੇ ਸਰਲ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਜਿਸ ਨਾਲ ਕਿਰਤ ਦੀ ਤੀਬਰਤਾ ਅਤੇ ਨਮੂਨੇ ਲੈਣ ਦੀ ਗਲਤੀ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੋ ਸਕਦੀ ਹੈ. ਉੱਚ-ਕਾਰਗੁਜ਼ਾਰੀ ਵਾਲਾ ਪੀਸੀਆਰ ਵਧਾਉਣ ਵਾਲਾ ਅਤੇ ਓਪਟੀਮਾਈਜ਼ਰ ਵੀ ਮਿਸ਼ਰਣ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤਾ ਗਿਆ ਹੈ, ਜੋ ਪੀਸੀਆਰ ਦੀਆਂ ਸਥਿਤੀਆਂ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਘਟਾਉਂਦਾ ਹੈ.
Product ਇਸ ਉਤਪਾਦ ਵਿੱਚ ਡਾਈ-ਰੱਖਣ ਵਾਲੇ ਅਤੇ ਡਾਈ-ਮੁਕਤ ਦੋਵੇਂ ਪ੍ਰਣਾਲੀਆਂ ਹਨ. ਡਾਇ-ਵਾਲੇ ਮਾਸਟਰਮਿਕਸ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਪੀਸੀਆਰ ਤੋਂ ਬਾਅਦ ਸਿੱਧਾ ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਬਿਨਾਂ ਲੋਡਿੰਗ ਬਫਰ ਨੂੰ ਸ਼ਾਮਲ ਕੀਤੇ.
ਇਹ ਜੀਨੋਮ ਵਰਗੇ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਨਮੂਨੇ ਤੋਂ ਉੱਚ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਪੀਐਫਯੂ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਨੂੰ ਬਦਲ ਸਕਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਇਹ ਪ੍ਰਗਟਾਵੇ ਜੀਨਾਂ ਦੀ ਕਲੋਨਿੰਗ, ਸਾਈਟ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਪਰਿਵਰਤਨ ਅਤੇ ਸਿੰਗਲ ਨਿcleਕਲੀਓਟਾਈਡ ਪੋਲੀਮੋਰਫਿਜ਼ਮ (ਐਸਐਨਪੀ) ਆਦਿ ਦੇ ਵਿਸ਼ਲੇਸ਼ਣ ਵਰਗੇ ਉਪਯੋਗਾਂ ਲਈ isੁਕਵਾਂ ਹੈ.
ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨ ਵਿੱਚ ਸਾਵਧਾਨੀਆਂ:
ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ 20-25 ਮੇਰ ਹੁੰਦੀ ਹੈ. ਹਾਲਾਂਕਿ, ਲੰਬੇ ਟੁਕੜੇ ਪੀਸੀਆਰ ਕਰਦੇ ਸਮੇਂ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਵਧਾ ਕੇ 30-35 ਮਰਰ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
Pri ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰਾਂ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਕੋਈ ਪੂਰਕ ਜੋੜੀ ਨਹੀਂ ਹੈ, ਖ਼ਾਸਕਰ 3 ′ ਸਿਰੇ ਤੇ ਪਿਛਲੇ 3 ਅਧਾਰਾਂ ਲਈ.
■ ਜੀਸੀ ਸਮਗਰੀ 50-60%ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ, ਅਤੇ ਸਥਾਨਕ ਅਮੀਰ ਜੀਸੀ ਜਾਂ ਏਟੀ ਤੋਂ ਬਚੋ. ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸਥਾਈ ਰੂਪ ਨਾਲ ਜੋੜਨ ਲਈ, 3 ′ ਸਿਰੇ ਤੇ ਅਮੀਰ structureਾਂਚੇ ਤੋਂ ਬਚੋ.
Secondary ਸੈਕੰਡਰੀ structureਾਂਚਾ ਬਣਾਉਣ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਤੋਂ ਬਚੋ.
M ਇੱਕ ਦੂਜੇ ਦੇ ਨੇੜੇ ਟੀਐਮ ਤਾਪਮਾਨ ਵਾਲੇ ਦੋ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਚੁਣੋ.
ਪੀਸੀਆਰ ਲਈ ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ ਦੇ ਟੀਐਮ ਮੁੱਲ ਦੀ ਗਣਨਾ:
■ ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 20 ਮਰ ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੋਵੇ: Tm = 2 ° C × (A+T)+4 ° C × (G+C).
■ ਜਦੋਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ 20 ਮਰ ਤੋਂ ਵੱਧ ਹੋਵੇ: Tm = 81.5+0.41 G (GC%)-600/L, ਜਿੱਥੇ L ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਹੈ.
The ਐਨੀਲਿੰਗ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ (Tm-5) ■ C ਤੇ ਸੈਟ ਕਰੋ.
ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ ਦੀ finalੁਕਵੀਂ ਅੰਤਮ ਇਕਾਗਰਤਾ 0.1 μM ਅਤੇ 1.0 μM ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਚੁਣੀ ਜਾ ਸਕਦੀ ਹੈ. ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਇਕਾਗਰਤਾ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦੀ ਘੱਟ ਉਪਜ ਵੱਲ ਲੈ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਜਦੋਂ ਕਿ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਇਕਾਗਰਤਾ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਵਿਸਤਾਰ ਲਈ ਵਧੇਰੇ ਸੰਭਾਵਨਾ ਹੁੰਦੀ ਹੈ. ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, ਜਦੋਂ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਵੱਡੀ ਜਾਂ ਗੁੰਝਲਦਾਰ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਮਨੁੱਖੀ ਜੀਨੋਮ ਡੀਐਨਏ) ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਟੈਮਪਲੇਟ ਵਜੋਂ ਕੀਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਘੱਟ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ. ਜਦੋਂ ਟੈਮਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਛੋਟੀ ਜਾਂ ਸਧਾਰਨ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ (ਉਦਾਹਰਣ ਵਜੋਂ, ਪਲਾਜ਼ਮੀਡ ਡੀਐਨਏ, ਆਦਿ) ਨੂੰ ਟੈਮਪਲੇਟ ਦੇ ਤੌਰ ਤੇ ਵਰਤੀ ਜਾਂਦੀ ਹੈ, ਤਾਂ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਧੇਰੇ ਹੋਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ.
ਸਾਰੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੂੰ ODM/OEM ਲਈ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਕੀਤਾ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਵੇਰਵਿਆਂ ਲਈ,ਕਿਰਪਾ ਕਰਕੇ ਅਨੁਕੂਲਿਤ ਸੇਵਾ (ODM/OEM) ਤੇ ਕਲਿਕ ਕਰੋ
1 ਕੇਬੀ ਦੇ ਟੁਕੜੇ ਨੂੰ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਜੀਨੋਮਿਕ ਡੀਐਨਏ ਨੂੰ ਨਮੂਨੇ ਵਜੋਂ ਵਰਤੋ ਪੀਸੀਆਰ ਪ੍ਰਤੀਕ੍ਰਿਆ ਦੇ ਬਾਅਦ, ਇਲੈਕਟ੍ਰੋਫੋਰਸਿਸ ਖੋਜ ਲਈ 5 μl ਲਓ. |
ਏ -1 ਟੈਮਪਲੇਟ
■ ਟੈਮਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਜਾਂ ਟਾਕ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ, ਆਦਿ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ - ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰੋ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਜਾਂ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਿੱਟਾਂ ਨਾਲ ਟੈਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਕੱ extractੋ.
Template ਟੈਮਪਲੇਟ ਦਾ ਵਿਕਾਰ ਪੂਰਨ ਨਹੀਂ ਹੈ den denੁਕਵੇਂ denੰਗ ਨਾਲ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਸਮਾਂ ਲੰਮਾ ਕਰੋ.
■ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡਿਗ੍ਰੇਡੇਸ਼ਨ-ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਤਿਆਰ ਕਰੋ.
ਏ -2 ਪ੍ਰਾਈਮਰ
Pri ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਮਾੜੀ ਕੁਆਲਿਟੀ-ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਸਿੰਥੇਸਾਈਜ਼ ਕਰੋ.
■ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਗ੍ਰੇਡੇਸ਼ਨ - ਉੱਚ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲਣ ਲਈ ਛੋਟੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਵੰਡੋ. ਮਲਟੀਪਲ ਫ੍ਰੀਜ਼ਿੰਗ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਜਾਂ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ 4 ° C ਕ੍ਰਿਓਪਰੇਸਡ ਤੋਂ ਬਚੋ.
Pri ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ ਦਾ ਅਣਉਚਿਤ ਡਿਜ਼ਾਇਨ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨਹੀਂ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਬਣਿਆ ਡਾਈਮਰ, ਆਦਿ) -ਮੁੜ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਈਮਰ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ structureਾਂਚੇ ਦੇ ਨਿਰਮਾਣ ਤੋਂ ਬਚੋ)
ਏ -3 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ2+ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ
■ ਐਮ.ਜੀ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ - ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਧਾਓ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ2+ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ2+ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.
ਏ -4 ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ
An ਉੱਚ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਬੰਧਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ. ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘਟਾਓ ਅਤੇ 2 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ withਾਲ ਨਾਲ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ.
ਏ -5 ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ
■ ਛੋਟਾ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ extension ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਵਧਾਓ.
ਘਟਨਾ: ਨੈਗੇਟਿਵ ਨਮੂਨੇ ਵੀ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ.
ਪੀਸੀਆਰ ਦਾ ਏ -1 ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ
Target ਟਾਰਗੇਟ ਕ੍ਰਮ ਜਾਂ ਵਿਸਤਾਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦਾ ਸੰਕਰਮਣ —— ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਵਾਲੇ ਪਾਈਪਟ ਨਾ ਕਰੋ ਜਾਂ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿ tubeਜ ਟਿਬ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਨਾ ਸੁੱਟੋ. ਮੌਜੂਦਾ ਨਿ nuਕਲੀਕ ਐਸਿਡਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਲਈ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਜਾਂ ਉਪਕਰਣ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਗੰਦਗੀ ਦੀ ਹੋਂਦ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.
■ ਰੀਐਜੈਂਟ ਗੰਦਗੀ - ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਅਤੇ ਸਟੋਰ ਨੂੰ ਸਪਸ਼ਟ ਕਰੋ.
ਏ -2 ਪ੍ਰਾਈਮr
■ ਐਮ.ਜੀ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ - ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਧਾਓ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ2+ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ2+ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.
■ ਗਲਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ, ਅਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਾਨਤਾ ਹੈ. -ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ.
ਫਿਨੋਮੇਨਾ: ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਉਮੀਦ ਕੀਤੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨਾਲ ਅਸੰਗਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਵੱਡੇ ਜਾਂ ਛੋਟੇ, ਜਾਂ ਕਈ ਵਾਰ ਦੋਵੇਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ.
ਏ -1 ਪ੍ਰਾਈਮਰ
Pri ਖਰਾਬ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ
-ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ.
■ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਵਿਗਾੜ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਸਹੀ increaseੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰੋ.
ਏ -2 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ2+ ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ
■ ਐਮ.ਜੀ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਐਮਜੀ 2+ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾਓ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ2+ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ2+ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.
ਏ -3 ਥਰਮੋਸਟੇਬਲ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼
En ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 0.5 0.5 ਯੂ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲਾਂ ਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ uceੁਕਵਾਂ ਘਟਾਓ.
ਏ -4 ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ
Ne ਐਨੀਲਿੰਗ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ the neੁਕਵੇਂ anੰਗ ਨਾਲ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ ਜਾਂ ਦੋ-ਪੜਾਅ ਐਨੀਲਿੰਗ ਵਿਧੀ ਅਪਣਾਓ
ਏ -5 ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ
Many ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ - ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਘਟਾਓ.
ਏ -1 ਪ੍ਰਾਈਮਰOor ਮਾੜੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ-ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰੋ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਅਤੇ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਇਸਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਬਦਲੋ; ਜਾਂ ਨੇਸਟਡ ਪੀਸੀਆਰ ਕਰੋ.
ਏ -2 ਟੈਮਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ
ਟੈਂਪਲੇਟ ਸ਼ੁੱਧ ਨਹੀਂ ਹੈ - ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰੋ ਜਾਂ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਿੱਟਾਂ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਕੱੋ.
ਏ -3 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ2+ ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ
—— ਐਮਜੀ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾਓ2+ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ2+ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ2+ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.
ਏ -4 ਡੀਐਨਟੀਪੀ
- ਡੀ ਐਨ ਟੀ ਪੀ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਡੀ ਐਨ ਟੀ ਪੀ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ lyੁਕਵੇਂ ੰਗ ਨਾਲ ਘਟਾਓ
ਏ -5 ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ
Low ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ an neੁਕਵੇਂ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ
ਏ -6 ਸਾਈਕਲ
Many ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਚੱਕਰ - ਸਾਈਕਲ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ
ਪਹਿਲਾ ਕਦਮ ਉਚਿਤ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨਾ ਹੈ. ਨਿਯਮਤ ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ 3'-5 'ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਘਾਟ ਕਾਰਨ ਪਰੂਫ ਰੀਡ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ, ਅਤੇ ਮੇਲ ਨਾ ਖਾਣ ਨਾਲ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੋ ਜਾਵੇਗੀ. ਇਸ ਲਈ, ਨਿਯਮਤ ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ 5 ਕੇਬੀ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਟੀਚੇ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾ ਨਹੀਂ ਸਕਦਾ. ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਅਤੇ ਲੰਮੇ ਟੁਕੜੇ ਵਧਾਉਣ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੋਧ ਜਾਂ ਹੋਰ ਉੱਚ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਚੋਣ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ. ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਲੰਮੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਸਤਾਰ ਲਈ ਵੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਅਨੁਕੂਲਤਾ, ਵਿਗਾੜ ਦਾ ਸਮਾਂ, ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ, ਬਫਰ ਪੀਐਚ, ਆਦਿ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ. ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 18-24 ਬੀਪੀ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਧੀਆ ਉਪਜ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹਨ. ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ, 94 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਵਿਗਾੜ ਦਾ ਸਮਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਸੈਕਿੰਡ 30 ਸਕਿੰਟ ਜਾਂ ਘੱਟ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਸਤਾਰ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ 94 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੱਕ ਵਧਾਉਣ ਦਾ ਸਮਾਂ 1 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ. ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਲਗਭਗ 68 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੇ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਟਾਈਮ ਨੂੰ 1 ਕੇਬੀ/ਮਿੰਟ ਦੀ ਦਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨਾ ਲੰਬੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਵਿਸਤਾਰ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.
ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਗਲਤੀ ਦਰ ਨੂੰ ਉੱਚ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਵਾਲੇ ਵੱਖ -ਵੱਖ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਹੁਣ ਤੱਕ ਪਾਏ ਗਏ ਸਾਰੇ ਤਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮਰੇਜਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਪੀਐਫਯੂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਘੱਟ ਗਲਤੀ ਦਰ ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਹੈ (ਨੱਥੀ ਸਾਰਣੀ ਵੇਖੋ). ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਚੋਣ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਖੋਜਕਰਤਾ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾ ਕੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਰ ਨੂੰ ਹੋਰ ਘਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਫਰ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣਾ, ਥਰਮੋਸਟੇਬਲ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ.
ਇਸ ਦੀ ਸਥਾਪਨਾ ਤੋਂ ਬਾਅਦ, ਸਾਡੀ ਫੈਕਟਰੀ ਸਿਧਾਂਤ ਦੀ ਪਾਲਣਾ ਕਰਦਿਆਂ ਪਹਿਲੇ ਵਿਸ਼ਵ ਪੱਧਰੀ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦਾ ਵਿਕਾਸ ਕਰ ਰਹੀ ਹੈ
ਗੁਣਵੱਤਾ ਦੇ ਪਹਿਲੇ. ਸਾਡੇ ਉਤਪਾਦਾਂ ਨੇ ਉਦਯੋਗ ਵਿੱਚ ਸ਼ਾਨਦਾਰ ਨਾਮਣਾ ਖੱਟਿਆ ਹੈ ਅਤੇ ਨਵੇਂ ਅਤੇ ਪੁਰਾਣੇ ਗਾਹਕਾਂ ਵਿੱਚ ਕੀਮਤੀ ਵਿਸ਼ਵਾਸ.