2, ਹੌਟਸਟਾਰਟ ਟੈੱਕ ਪੀਸੀਆਰ ਮਿਕਸ

ਏ -1 ਟੈਮਪਲੇਟ

■ ਟੈਮਪਲੇਟ ਵਿੱਚ ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਜਾਂ ਟਾਕ ਇਨਿਹਿਬਟਰਸ, ਆਦਿ ਸ਼ਾਮਲ ਹਨ - ਡੀਐਨਏ ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰੋ, ਪ੍ਰੋਟੀਨ ਦੀ ਅਸ਼ੁੱਧੀਆਂ ਨੂੰ ਹਟਾਓ ਜਾਂ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਿੱਟਾਂ ਨਾਲ ਟੈਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ ਕੱ extractੋ.

Template ਟੈਮਪਲੇਟ ਦਾ ਵਿਕਾਰ ਪੂਰਨ ਨਹੀਂ ਹੈ den denੁਕਵੇਂ denੰਗ ਨਾਲ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ਕਾਰੀ ਸਮਾਂ ਲੰਮਾ ਕਰੋ.

■ ਟੈਂਪਲੇਟ ਡਿਗ੍ਰੇਡੇਸ਼ਨ-ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਤਿਆਰ ਕਰੋ.

ਏ -2 ਪ੍ਰਾਈਮਰ

Pri ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਮਾੜੀ ਕੁਆਲਿਟੀ-ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਸਿੰਥੇਸਾਈਜ਼ ਕਰੋ.

■ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਗ੍ਰੇਡੇਸ਼ਨ - ਉੱਚ ਇਕਾਗਰਤਾ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ ਨੂੰ ਸੰਭਾਲਣ ਲਈ ਛੋਟੇ ਆਕਾਰ ਵਿੱਚ ਵੰਡੋ. ਮਲਟੀਪਲ ਫ੍ਰੀਜ਼ਿੰਗ ਅਤੇ ਪਿਘਲਣ ਜਾਂ ਲੰਬੇ ਸਮੇਂ ਲਈ 4 ° C ਕ੍ਰਿਓਪਰੇਸਡ ਤੋਂ ਬਚੋ.

Pri ਪ੍ਰਾਈਮਰਸ ਦਾ ਅਣਉਚਿਤ ਡਿਜ਼ਾਇਨ (ਜਿਵੇਂ ਕਿ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਲੰਬਾਈ ਕਾਫ਼ੀ ਨਹੀਂ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੇ ਵਿਚਕਾਰ ਬਣਿਆ ਡਾਈਮਰ, ਆਦਿ) -ਮੁੜ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ (ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਾਈਮਰ ਅਤੇ ਸੈਕੰਡਰੀ structureਾਂਚੇ ਦੇ ਨਿਰਮਾਣ ਤੋਂ ਬਚੋ)

ਏ -3 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ²⁺ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ

■ ਐਮ.ਜੀ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ - ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਧਾਓ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ²⁺ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ²⁺ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.

ਏ -4 ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ

An ਉੱਚ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਅਤੇ ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਬੰਧਨ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਤ ਕਰਦਾ ਹੈ. ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਘਟਾਓ ਅਤੇ 2 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਦੇ withਾਲ ਨਾਲ ਸਥਿਤੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ.

ਏ -5 ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ

■ ਛੋਟਾ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ extension ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ ਵਧਾਓ.

ਘਟਨਾ: ਨੈਗੇਟਿਵ ਨਮੂਨੇ ਵੀ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਬੈਂਡ ਦਿਖਾਉਂਦੇ ਹਨ.

ਪੀਸੀਆਰ ਦਾ ਏ -1 ਪ੍ਰਦੂਸ਼ਣ

Target ਟਾਰਗੇਟ ਕ੍ਰਮ ਜਾਂ ਵਿਸਤਾਰ ਉਤਪਾਦਾਂ ਦਾ ਸੰਕਰਮਣ —— ਧਿਆਨ ਨਾਲ ਨਮੂਨੇ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਮੂਨੇ ਵਿੱਚ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਵਾਲੇ ਪਾਈਪਟ ਨਾ ਕਰੋ ਜਾਂ ਉਨ੍ਹਾਂ ਨੂੰ ਸੈਂਟਰਿਫਿ tubeਜ ਟਿਬ ਤੋਂ ਬਾਹਰ ਨਾ ਸੁੱਟੋ. ਮੌਜੂਦਾ ਨਿ nuਕਲੀਕ ਐਸਿਡਾਂ ਨੂੰ ਖਤਮ ਕਰਨ ਲਈ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਜਾਂ ਉਪਕਰਣ ਆਟੋਕਲੇਵ ਕੀਤੇ ਜਾਣੇ ਚਾਹੀਦੇ ਹਨ, ਅਤੇ ਗੰਦਗੀ ਦੀ ਹੋਂਦ ਨੂੰ ਨਕਾਰਾਤਮਕ ਨਿਯੰਤਰਣ ਪ੍ਰਯੋਗਾਂ ਦੁਆਰਾ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕੀਤਾ ਜਾਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ.

■ ਰੀਐਜੈਂਟ ਗੰਦਗੀ - ਘੱਟ ਤਾਪਮਾਨ 'ਤੇ ਰੀਐਜੈਂਟਸ ਅਤੇ ਸਟੋਰ ਨੂੰ ਸਪਸ਼ਟ ਕਰੋ.

ਏ -2 ਪ੍ਰਾਈਮr

■ ਐਮ.ਜੀ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ - ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਵਧਾਓ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ²⁺ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ²⁺ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.

■ ਗਲਤ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ, ਅਤੇ ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਵਿੱਚ ਗੈਰ-ਨਿਸ਼ਾਨਾ ਕ੍ਰਮ ਦੇ ਨਾਲ ਸਮਾਨਤਾ ਹੈ. -ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ.

ਫਿਨੋਮੇਨਾ: ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਉਮੀਦ ਕੀਤੇ ਆਕਾਰ ਦੇ ਨਾਲ ਅਸੰਗਤ ਹੁੰਦੇ ਹਨ, ਵੱਡੇ ਜਾਂ ਛੋਟੇ, ਜਾਂ ਕਈ ਵਾਰ ਦੋਵੇਂ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਅਤੇ ਗੈਰ-ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਬੈਂਡ ਹੁੰਦੇ ਹਨ.

ਏ -1 ਪ੍ਰਾਈਮਰ

Pri ਖਰਾਬ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ

-ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਪ੍ਰਾਈਮਰ.

■ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਵਿਗਾੜ ਦੇ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ ਸਹੀ increaseੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾਓ ਅਤੇ ਵਿਨਾਸ਼ ਦੇ ਸਮੇਂ ਨੂੰ ਲੰਮਾ ਕਰੋ.

ਏ -2 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ²⁺ ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ

■ ਐਮ.ਜੀ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਐਮਜੀ 2+ ਇਕਾਗਰਤਾ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾਓ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ²⁺ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ²⁺ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.

ਏ -3 ਥਰਮੋਸਟੇਬਲ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼

En ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ 0.5 0.5 ਯੂ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲਾਂ ਤੇ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਮਾਤਰਾ ਨੂੰ uceੁਕਵਾਂ ਘਟਾਓ.

ਏ -4 ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ

Ne ਐਨੀਲਿੰਗ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੈ the neੁਕਵੇਂ anੰਗ ਨਾਲ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ ਜਾਂ ਦੋ-ਪੜਾਅ ਐਨੀਲਿੰਗ ਵਿਧੀ ਅਪਣਾਓ

ਏ -5 ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ

Many ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ - ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰਾਂ ਦੀ ਸੰਖਿਆ ਘਟਾਓ.

ਏ -1 ਪ੍ਰਾਈਮਰOor ਮਾੜੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ-ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਨੂੰ ਦੁਬਾਰਾ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰੋ, ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਦੀ ਸਥਿਤੀ ਅਤੇ ਲੰਬਾਈ ਨੂੰ ਇਸਦੀ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ਤਾ ਵਧਾਉਣ ਲਈ ਬਦਲੋ; ਜਾਂ ਨੇਸਟਡ ਪੀਸੀਆਰ ਕਰੋ.

ਏ -2 ਟੈਮਪਲੇਟ ਡੀਐਨਏ

ਟੈਂਪਲੇਟ ਸ਼ੁੱਧ ਨਹੀਂ ਹੈ - ਟੈਂਪਲੇਟ ਨੂੰ ਸ਼ੁੱਧ ਕਰੋ ਜਾਂ ਸ਼ੁੱਧਤਾ ਕਿੱਟਾਂ ਨਾਲ ਡੀਐਨਏ ਕੱੋ.

ਏ -3 ਮਿਲੀਗ੍ਰਾਮ²⁺ ਧਿਆਨ ਟਿਕਾਉਣਾ

—— ਐਮਜੀ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਚੰਗੀ ਤਰ੍ਹਾਂ ਘਟਾਓ²⁺ ਇਕਾਗਰਤਾ: ਐਮਜੀ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ²⁺ ਅਨੁਕੂਲ ਐਮਜੀ ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨ ਲਈ 0.5 ਐਮਐਮ ਦੇ ਅੰਤਰਾਲ ਦੇ ਨਾਲ 1 ਐਮਐਮ ਤੋਂ 3 ਐਮਐਮ ਤੱਕ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮਾਂ ਦੀ ਲੜੀ ਦੁਆਰਾ ਇਕਾਗਰਤਾ²⁺ ਹਰੇਕ ਟੈਪਲੇਟ ਅਤੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਲਈ ਇਕਾਗਰਤਾ.

ਏ -4 ਡੀਐਨਟੀਪੀ

- ਡੀ ਐਨ ਟੀ ਪੀ ਦੀ ਇਕਾਗਰਤਾ ਬਹੁਤ ਜ਼ਿਆਦਾ ਹੈ - ਡੀ ਐਨ ਟੀ ਪੀ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਨੂੰ lyੁਕਵੇਂ ੰਗ ਨਾਲ ਘਟਾਓ

ਏ -5 ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ

Low ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ an neੁਕਵੇਂ ਤਰੀਕੇ ਨਾਲ ਐਨੀਲਿੰਗ ਤਾਪਮਾਨ ਵਧਾਓ

ਏ -6 ਸਾਈਕਲ

Many ਬਹੁਤ ਸਾਰੇ ਚੱਕਰ - ਸਾਈਕਲ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉ

ਪਹਿਲਾ ਕਦਮ ਉਚਿਤ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਚੋਣ ਕਰਨਾ ਹੈ. ਨਿਯਮਤ ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ 3'-5 'ਐਕਸੋਨੁਕਲੀਜ਼ ਗਤੀਵਿਧੀ ਦੀ ਘਾਟ ਕਾਰਨ ਪਰੂਫ ਰੀਡ ਨਹੀਂ ਕਰ ਸਕਦਾ, ਅਤੇ ਮੇਲ ਨਾ ਖਾਣ ਨਾਲ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੀ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਬਹੁਤ ਘੱਟ ਹੋ ਜਾਵੇਗੀ. ਇਸ ਲਈ, ਨਿਯਮਤ ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ 5 ਕੇਬੀ ਤੋਂ ਵੱਡੇ ਟੀਚੇ ਦੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਨੂੰ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ੰਗ ਨਾਲ ਵਧਾ ਨਹੀਂ ਸਕਦਾ. ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਕੁਸ਼ਲਤਾ ਨੂੰ ਬਿਹਤਰ ਬਣਾਉਣ ਅਤੇ ਲੰਮੇ ਟੁਕੜੇ ਵਧਾਉਣ ਦੀਆਂ ਜ਼ਰੂਰਤਾਂ ਨੂੰ ਪੂਰਾ ਕਰਨ ਲਈ ਵਿਸ਼ੇਸ਼ ਸੋਧ ਜਾਂ ਹੋਰ ਉੱਚ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੇ ਨਾਲ ਤਾਕ ਪੋਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਚੋਣ ਕੀਤੀ ਜਾਣੀ ਚਾਹੀਦੀ ਹੈ. ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਲੰਮੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਵਿਸਤਾਰ ਲਈ ਵੀ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਦੇ ਅਨੁਕੂਲ ਅਨੁਕੂਲਤਾ, ਵਿਗਾੜ ਦਾ ਸਮਾਂ, ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਸਮਾਂ, ਬਫਰ ਪੀਐਚ, ਆਦਿ ਦੀ ਲੋੜ ਹੁੰਦੀ ਹੈ. ਆਮ ਤੌਰ 'ਤੇ, 18-24 ਬੀਪੀ ਵਾਲੇ ਪ੍ਰਾਈਮਰ ਵਧੀਆ ਉਪਜ ਦੇ ਸਕਦੇ ਹਨ. ਟੈਂਪਲੇਟ ਦੇ ਨੁਕਸਾਨ ਨੂੰ ਰੋਕਣ ਲਈ, 94 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ 'ਤੇ ਵਿਗਾੜ ਦਾ ਸਮਾਂ ਪ੍ਰਤੀ ਸੈਕਿੰਡ 30 ਸਕਿੰਟ ਜਾਂ ਘੱਟ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ, ਅਤੇ ਵਿਸਤਾਰ ਤੋਂ ਪਹਿਲਾਂ ਤਾਪਮਾਨ ਨੂੰ 94 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੱਕ ਵਧਾਉਣ ਦਾ ਸਮਾਂ 1 ਮਿੰਟ ਤੋਂ ਘੱਟ ਹੋਣਾ ਚਾਹੀਦਾ ਹੈ. ਇਸ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਦਾ ਤਾਪਮਾਨ ਲਗਭਗ 68 ਡਿਗਰੀ ਸੈਲਸੀਅਸ ਤੇ ​​ਨਿਰਧਾਰਤ ਕਰਨਾ ਅਤੇ ਐਕਸਟੈਂਸ਼ਨ ਟਾਈਮ ਨੂੰ 1 ਕੇਬੀ/ਮਿੰਟ ਦੀ ਦਰ ਦੇ ਅਨੁਸਾਰ ਡਿਜ਼ਾਈਨ ਕਰਨਾ ਲੰਬੇ ਟੁਕੜਿਆਂ ਦੇ ਪ੍ਰਭਾਵਸ਼ਾਲੀ ਵਿਸਤਾਰ ਨੂੰ ਯਕੀਨੀ ਬਣਾ ਸਕਦਾ ਹੈ.

ਪੀਸੀਆਰ ਐਂਪਲੀਫਿਕੇਸ਼ਨ ਦੀ ਗਲਤੀ ਦਰ ਨੂੰ ਉੱਚ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਵਾਲੇ ਵੱਖ -ਵੱਖ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਵਰਤੋਂ ਕਰਕੇ ਘਟਾਇਆ ਜਾ ਸਕਦਾ ਹੈ. ਹੁਣ ਤੱਕ ਪਾਏ ਗਏ ਸਾਰੇ ਤਾਕ ਡੀਐਨਏ ਪੌਲੀਮਰੇਜਾਂ ਵਿੱਚੋਂ, ਪੀਐਫਯੂ ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਵਿੱਚ ਸਭ ਤੋਂ ਘੱਟ ਗਲਤੀ ਦਰ ਅਤੇ ਸਭ ਤੋਂ ਵੱਧ ਵਫ਼ਾਦਾਰੀ ਹੈ (ਨੱਥੀ ਸਾਰਣੀ ਵੇਖੋ). ਐਨਜ਼ਾਈਮ ਦੀ ਚੋਣ ਤੋਂ ਇਲਾਵਾ, ਖੋਜਕਰਤਾ ਪ੍ਰਤੀਕਰਮ ਸਥਿਤੀਆਂ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾ ਕੇ ਪੀਸੀਆਰ ਪਰਿਵਰਤਨ ਦਰ ਨੂੰ ਹੋਰ ਘਟਾ ਸਕਦੇ ਹਨ, ਜਿਸ ਵਿੱਚ ਬਫਰ ਰਚਨਾ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣਾ, ਥਰਮੋਸਟੇਬਲ ਪੌਲੀਮੇਰੇਜ਼ ਦੀ ਗਾੜ੍ਹਾਪਣ ਅਤੇ ਪੀਸੀਆਰ ਚੱਕਰ ਨੰਬਰ ਨੂੰ ਅਨੁਕੂਲ ਬਣਾਉਣਾ ਸ਼ਾਮਲ ਹੈ.